葡萄可以真空塑封保存吗,2021年中式烹调师(中级)考试题及中式烹调师(中级)找解析 -爱游戏平台

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1、【单选题】麦芽糖单独加热，不温度达到150℃～160℃时，可生成褐红色或枣红色，不碳化，有作用。（??d??）

a、色彩

b、发色

c、着色

d、发色、生脆

2、【单选题】若将宴会菜点可容成本设为|宴会标准收入额设为m、宴会毛利率为r，则c=m·()。（??c??）

a、r

b、1 r

c、1-r

d、1/r

3、【单选题】加工大闸蟹时，应首先要用清水将大闸蟹浸泡，使其吐尽脏物。（??b??）

a、10分钟

b、20分钟

c、40分钟

d、60分钟

4、【单选题】可用()清除蔬菜叶片上的虫卵。（??c??）

a、汆水

b、熏蒸

c、2％食盐水洗涤

d、0.5％盐酸溶液洗涤

5、【单选题】冷菜装盘是将烹调好的冷菜，进行整理而装入盛器的最后一道工序。（??c??）

a、配料

b、刀工处理

c、刀工美化

d、切配

6、【单选题】属于我国特产的叶类蔬菜是()。（??c??）

a、生菜

b、菠菜

c、大白菜

d、卷心菜

7、【单选题】酒渍保存法是利用酒中的乙醇成分进行和抑制酶的活性，从而达到贮存目的。（??b??）

a、抑菌

b、杀菌

c、灭菌

d、活菌

8、【单选题】声望定价策略主要针对的是()。（??a??）

a、消费能力很强的顾客

b、消费能力一般的顾客

c、普通工薪阶层

d、求新猎奇的年轻人

9、【单选题】处于负氮平衡的人群主要是()。（??d??）

a、婴幼儿

b、孕妇

c、成年男性

d、老年人

10、【单选题】排列法就是将加工成型的原料，按照成型要求，均匀整齐地排列定型的加工方法。（??a??）

a、一定的

b、规定的

c、指定的

d、习惯的

11、【单选题】封闭保管又称。（??b??）

a、真空保管

b、密封保管

c、罐封保管

d、塑封保管

12、【单选题】我国规定糖精或其钠盐在食品中的用量为g/kg。（??a??）

a、0.15

b、0.25

c、0.3

d、0.5

13、【单选题】同一规格、质量的原料，由于加工技术的不同，原料的出材率。（??d??）

a、相同

b、不变

c、一定减少

d、不一定相同

14、【单选题】餐饮销售与利润的差，构成餐饮产品的。（??b??）

a、毛利额

b、成本

c、原料成本

d、人工费用

15、【单选题】佝偻病主要是由于膳食中长期缺乏()而引起的。（??b??）

a、维生素ａ

b、维生素d

c、维生素ｅ

d、核黄素

16、【单选题】红烧鱼在出锅前，淋少量的()有起香的作用。（??d??）

a、黄酒

b、芡汁

c、葱汁

d、醋

17、【单选题】汁的品种很多，其类别划分包括、味型种类和用途种类。（??a??）

a、色泽种类

b、食用种类

c、菜系种类

d、原为种类

18、【单选题】焖制法的火力要求是为加热不同阶段使用。（??b??）

a、大火→小火出锅

b、大火→小火→大火出锅

c、大火→中火→小火出锅

d、小火→大火→小火出锅

19、【单选题】装盘器皿在色彩上应以突出、衬托为原则。（??b??）

a、菜肴品质

b、菜肴造型

c、菜肴色彩

d、菜肴价格

20、【单选题】蛋黄的颜色主要取决于其中()的含量。（??b??）

a、叶黄素

b、胡萝卜素

c、核黄素

d、姜黄素

21、【单选题】关于产品成长期的定价策略，下列说法不正确的是()。（??a??）

a、运用变动成本对饮食产品进行定价

b、采取措施抵御模仿者进入

c、运用价格手段拓展市场

d、努力扩大产品的市场份额

22、【单选题】烧菜收稠卤汁的方法，有勾芡增稠与()之分。（??c??）

a、面酱增稠

b、面粉增稠

c、自然增稠

d、胶粉增稠

23、【单选题】除选项外，其余三项都是造成蔬果类原料污染、变质的原因。（??a??）

a、放射性污染

b、肠道致病菌和寄生虫卵污染

c、污水、废水污染

d、农药污染

24、【单选题】为油酥制品—小鸡酥保持较好的造型，使用()较好。（??a??）

a、豆沙馅

b、枷樱馅

c、三鲜馅

d、猪肉馅

25、【单选题】层酥面坯是由两块()不同的面坯组成的。（??c??）

a、原料

b、颜色

c、质感

d、软硬度

26、【单选题】对人体有生理意义的多糖主要有：淀粉、糖原和。（??c??）

a、葡萄糖

b、半乳糖

c、纤维素

d、蔗糖

27、【单选题】千岛汁原是()使用的一种调料。（??c??）

a、中餐中

b、面点中

c、西餐中

d、蛋糕中

28、【单选题】围边要以整齐、匀称、平展来技艺效果，使其形成一个完整的表面。（??c??）

a、夸张

b、美化

c、体现

d、描绘

29、【单选题】为了使酱制后的菜肴颜色更为鲜艳，()处理时可用少量酱油涂抹原料表皮。（??a??）

a、油炸

b、油焐

c、滑油

d、油浸

30、【单选题】脚气病的产生与()的缺乏有关。（??a??）

a、维生素b1

b、维生素a

c、维生素ｅ

d、维生素ｃ

31、【单选题】干煸法，其主料不用处理，直接煸炒。（??a??）

a、上浆

b、切配

c、出骨

d、抓腌

32、【单选题】猪颈肉，肥肉多、、筋膜较多、肉色红。（??b??）

a、肉质韧

b、肉质老

c、肉质柔韧

d、肉质硬实

33、【单选题】猪硬肋又称()，位于肋骨下方，脂肪与肌肉相间成五层。（??a??）

a、上五花肉

b、下五花肉

c、扁担肉

d、梅条肉

34、【单选题】注意水产品()的整齐与美观，是水产品初步加工的基本要求。（??a??）

a、成形

b、形态

c、形状

d、规格

35、【单选题】打制鱼青时，每500g鱼青蓉配蛋清()克。（??b??）

a、120

b、100

c、60

d、80

36、【单选题】西湖醋鱼要将鱼身劈成两半，带脊骨的一半称为()。（??c??）

a、单片

b、软片

c、雄片

d、雌片

37、【单选题】对肉类进行分割加工时，要熟悉加工器具的。（??d??）

a、品种产地

b、名称型号

c、使用程序

d、使用方法

38、【单选题】鲮鱼肉质弹性较强，色泽洁白，，但鱼刺较细而多，出肉率较低。（??c??）

a、细嫩味腥

b、软烂味鲜

c、细嫩鲜美

d、肉质较粗

39、【单选题】西红柿属于()蔬菜。（??b??）

a、瓠果类

b、浆果类

c、荚果类

d、假果类

40、【单选题】熬制法的操作与炖法十分相似，所不同的是熬制法需要。（??a??）

a、葱、姜炝锅

b、汤汁软炖的少

c、需要勾芡

d、形状是小形块状

41、【单选题】虾蓉面坯制作的点心成品有土腥味的原因是：调味时使用了()。（??a??）

a、料酒

b、胡椒粉

c、盐

d、糖

42、【单选题】双孢蘑菇子实体通体为白色，菌盖呈圆滑光洁的半球形，菌盖边缘，菌柄粗壮基部膨大。（??c??）

a、平展

b、上卷

c、内卷

d、稍内卷

43、【单选题】挂糊的粉料的选择，要根据()不同合理选择粉料品种。（??b??）

a、糊的质感

b、糊的品种

c、调糊时具体情况

d、原料的含水量

44、【单选题】清炒方法操作时，不能用调味品，以获得淡雅之特点。（??b??）

a、浓重

b、有色

c、酱油

d、胡椒

45、【单选题】猪颈肉，肥肉多、肉质老、、肉色红。（??c??）

a、肌束多

b、肌纤较多

c、筋膜较多

d、胎肪多

46、【单选题】狮头鹅为大型鹅品种，羽毛为乌棕色，皮下脂肪发达，肉质较为细嫩。（??b??）

a、脂用型

b、肉用型

c、肝用型

d、蛋用型

47、【单选题】秦川黄牛体形庞大，毛色，鞍部发达，具有良好的肉用特性。（??b??）

a、以黄棕居多

b、以枣红居多

c、以棕红居多

d、以红色居多

48、【单选题】按商品类型划分，可分为瘦肉型，脂用型，等。（??d??）

a、皮用型

b、药用型

c、毛用型

d、兼用型

49、【单选题】利用冰块将温度处于0℃，并保持此温度冰藏蔬菜的方法，是特有的一种传统方法。（??c??）

a、挪威

b、冰岛

c、中国

d、日本

50、【单选题】水炒法拔丝，糖和水的比例要适度，一般以为宜。（??b??）

a、150克糖，15克水

b、150克糖，25克水

c、150克糖，35克水

d、150克糖，50克水

51、【单选题】中式烹调中所谓，就是利用静止态油散热慢的特性对菜肴起保温作用的。（??b??）

a、油焐法

b、热油封面

c、热锅冷油

d、划油法

52、【单选题】干巴菌为野生品种，主要产于云南、、贵州、陕西的山区。（??b??）

a、江西

b、四川

c、安徽

d、河南

53、【单选题】草菇子实体以个体肥大完整，不开伞，，干燥不霉，无杂质为佳。（??c??）

a、色泽棕黄鲜明

b、色泽褐黄鲜明

c、色泽淡黄鲜明

d、色泽灰黄鲜明

54、【单选题】半围点缀摆放法是在餐盘的一边将点缀花拼制摆放成的方法。（??d??）

a、扇形

b、花边状

c、近圆状

d、半圆状

55、【单选题】蛏子在用盐水活养去沙时，盐水的浓度应在()左右。（??b??）

a、0.01

b、0.02

c、0.03

d、0.04

56、【单选题】积极进取就是要()，追求发展，争取进步。（??b??）

a、相互协调

b、不懈不待

c、乐于奉献

d、品德高尚

57、【单选题】原材料规格、质量和原材料的是决定出材率的两大因素。（??c??）

a、质地

b、性质

c、处理技术

d、采购数量

58、【单选题】塌法是()两种烹饪方法的混合形成技法。（??a??）

a、水和油

b、油和气

c、炸和熘

d、煎和炖

59、【单选题】下列胴体羊肉中，筋膜较多，肉质粗老，颜色暗红。（??a??）

a、颈肉

b、腹肉

c、肋肉

d、胸口肉

60、【单选题】蛋白稀浆炸菜式宜用()℃油温下锅炸制。（??b??）

a、120

b、150

c、180

d、200

61、【单选题】《本草纲目》除了是一部著名的医药书籍外，还是一部关于()方面的权威著作。（??a??）

a、食疗

b、饮食

c、菜单

d、饮膳

62、【单选题】银鱼体呈圆桶状，长20厘米，头部尖小，，尾鳍呈叉形。（??c??）

a、鱼体银白透明

b、鱼体洁白透明

c、鱼体银灰透明

d、鱼体半透明

63、【单选题】烹调中的汤，从广义上看分为两大类别。（??d??）

a、白汤和奶汤

b、清汤和浓汤

c、普通汤和高汤

d、成品汤羹和共处调味性汤

64、【判断题】文蛤为软体动物，肉质肥大，体呈斧形，淡黄色。（??√??）

65、【判断题】围边要以垫底原料为基础，根据拼盘的角度需要进行操作。正确错误（??√??）

66、【判断题】芫爆菜必须吃出葱蒜的味道。（??×??）

67、【判断题】确定定价目标的目的是使客人接受产品价格。2546、本着以食用为主的装盘原则，盛器规格与菜肴数量比应为1:1。显示标答（??×??）

68、【判断题】()热菜的香味是随空气扩散的，而冷菜的香味必须在高温时才能感知。（??×??）

69、【判断题】蚝油的产品加工须经过浓缩、调味、增稠等几道工序制成。（??√??）

70、【判断题】蒸发最适合一些较硬身又易散烂，又要保存其滋味的干货原料。（??√??）

71、【判断题】甲鱼在去除黑衣时，烫制的温度在80度时，烫制时间应控制在2分钟左右。（??√??）

72、【判断题】普通味精不宜在过酸、过辣的菜肴中使用。（??√??）

73、【判断题】酱油腌制品色泽以纯正棕褐方佳。（??×??）

74、【判断题】清远三黄鸡体型中等，为典型的肉用型鸡种。（??√??）

75、【判断题】()火候运用与原料形态密切相关，整齐划一的原料多采用旺火速成法烹制。（??×??）

76、【判断题】某产品毛利额30元，成本毛利率150%，此产品的售价是75元。（??×??）

77、【判断题】对黄鳝进行烫杀时，加热时间要短，以汆烫为宜。（??×??）

78、【判断题】无机盐可维持神经和肌肉的正常功能。（??√??）

79、【判断题】频繁而又大型的宴饮活动，大批量的、统一标准的复合味汁的使用效果可观。（??√??）

80、【判断题】使用压力锅之前，只要对安全阀进行仔细检查就可以了。（??×??）

81、【判断题】使用陶瓷容器盛装食物，不会造成食品污染。（??×??）

82、【判断题】盐渍保存法是通过改变原料的渗透压，破坏微生物的生长繁殖环境，从而达到贮存目的。（??√??）

83、【判断题】炒糖色的温度应控制在170℃～220℃之间。（??√??）

84、【判断题】根据《食品卫生法》规定，食品生产经营人员每月必须进行健康检查。（??×??）

85、【判断题】麦芽糖的发色、生脆温度为170℃～180℃。（??×??）

86、【判断题】川味辣椒油的制作，须将辣椒面放在足量的植物油中慢慢加热熬制，以达到红亮、浓烈的效果。（??√??）

87、【判断题】食品被细菌毒素、霉菌毒素污染，一般会引起急性中毒。（??√??）

88、【判断题】常量元素占人体矿物质总量的60%～90%。（??×??）

89、【判断题】未开封的调味品都可长时期的贮存。（??×??）

90、【判断题】()安全电压是指施加于人体上一定时间不会造成人体死亡的电压。（??×??）

91、【判断题】()根菜类蔬菜产量高，富含蛋白质等营养物质。（??×??）

92、【判断题】()狮头鹅是著名的肉用鹅。（??√??）

93、【判断题】滑熘菜，主料上浆后，进行油滑，温度不宜过高，并以断生为宜。（??√??）

94、【判断题】调味可以增加菜品的香气和滋味，故而诱发菜品的刺激能力，增进食欲。（??√??）

95、【判断题】标准黄油的乳脂含量应为85%。（??√??）

96、【判断题】卧式花色冷盘多可作观赏，不作食用。（??×??）

97、【判断题】泡油也叫走油、滑油、淋油、过油、拉油等。（??×??）

98、【判断题】刚宰杀后的畜肉呈弱酸性。（??×??）

99、【判断题】()鱼蓉面坯必须分次逐渐加水挞透，搅拌至发粘起胶才可加入其它原料制成坯。（??√??）

100、【判断题】1997年4月10日中国营养学会常务理事会通过了《中国居民膳食指南》。（??√??）

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安装方法：

1：下载libsvm保存保存到合适的路径，推荐matlab安装目录下的toolbox中例如：d:\program?files\matlab?2013a\toolbox\libsvm-3.18\matlab ，建议下载比较低版本的libsvm，过高版本的在由于缺少一部分文件容易报错

2：文件解压缩：

3. 将libsvm所在的文件夹加入matlab的搜索路径，在菜单栏的set?path中可以设置。matlab执行程序时，如果在当前路径下没有找到所需的文件，会在搜索路径中继续寻找，所以要确保要使用的文件至少在搜索中。如果matlab提示找不到文件，而文件又真是存在，很可能的原因是忘记将文件所在目录添加到matlab的搜索路径下了

4. 设置mex，这里要先将matlab的当前目录切换到libsvm安装目录下的matlab子文件夹上。这一步mex

的设置时并不是必须的，而是在后面的步骤时必须的，但是为了防止后面忘记，所以这里设置完搜索路径顺便设置当前目录。这个路径一定要切换，不然会报错找不到文件

在命令窗口输入

注意：mex –setup，注意mex后面有一个空格，也就是正确输入后setup的颜色会变，如果没有输入空格setup颜色为黑色而且运行命令会有错误提示。

接下来会让选择使用哪种编译器，选择自己电脑上所带有的，我使用的vs2012，根据自己matlab的版本和电脑环境自己选择就好了

5 在命令窗口输入：make

6编译完成系统会生成svmtrain.mexw64，svmpredict.mexw64，libsvmread.mexw64和libsvmwrite.mexw64等文件，现在就可以调用

7检验是否安装好：

注意到libsvm下有一个数据文件，名称为heart_scale。这是一个libsvm格式的数据文件。可使用libsvmread函数将其转化为matlab格式。

可使用以下命令测试：

[heart_scale_label,heart_scale_inst]=libsvmread('heart_scale');

model = svmtrain(heart_scale_label,heart_scale_inst, '-c 1 -g 0.07');

[predict_label, accuracy, dec_values] =svmpredict(heart_scale_label, heart_scale_inst, model); % test the trainingdata

如果出现一行：accuracy = 86.6667% (234/270) (classification)。就说明成功了。就可以在matlab中使用svm了。

错误1：

在make的时候会出现这样的错误：

link : fatal error lnk1181: cannot open input file 'kernel32.lib'

c:\progra~1\matlab\r2012b\bin\mex.pl: error: link of 'svmtrain.mexw64' failed.

error in make (line 5)

mex -o svmtrain.c svm.obj svm_model_matlab.obj

建议换低版本的libsvm尝试一下，我的是这么解决的

错误2：

使用命令[label_vector,?instance_matrix]?=?libsvmread(‘c 版本数据集’);来转换数据类型，出现error：

使用svm-train?heart_scale提示can't?open?input?file，

这里错误的原因是因为，当只给出文件名时，程序默认只在当前路径下寻找，而这里数据集并不在当前目录matlab子文件夹下，解决办法，一种是将数据拷贝到当前目录中，依然使用这条命令；

这里将数据文件拷贝到当前目录下，重新执行命令，在工作区可以看到数据已经成功读入了

为进一步提高《微生物组实验手册》稿件质量，本项目新增大众评审环节。文章在通过同行评审后，采用公众号推送方式分享全文，任何人均可在线提交修改意见。公众号格式显示略有问题，建议电脑端点击文末阅读原文下载pdf审稿。在线文档(https://kdocs.cn/l/cl8rrqhil)大众评审页面登记姓名、单位和行号索引的修改建议。修改意见的征集截止时间为推文发布后的72小时，文章将会结合有建设性的修改意见进一步修改后获得doi在线发表，同时根据贡献程度列为审稿人或致谢。感谢广大同行提出宝贵意见。

药用植物地下茎内生真菌的分离纯化及鉴定

isolation, purification and identification of endophytic fungi in chinese mecicinal plant underground stem

祝英1 *, 巩晓芳1, 杨晖 1, 周剑平2, 王治业1

1甘肃省微生物资源开发利用重点实验室甘肃省科学院生物研究所甘肃兰州

2甘肃省科学院自然能源研究所甘肃兰州

*通讯作者邮箱：zhuying_365@126.com

摘要：植物内生真菌不但能促进宿主植物生长，还能增强宿主植物抗旱、抗盐和抗病虫害的能力，特别是中药植物内生真菌能产生与中药植物相同或类似的生物活性物质，引起广大学者对中药植物内生真菌研究及功能开发的密切关注。内生真菌分离方法常采用组织表面消毒后破碎悬液培养法和去除表皮的组织块原位培养法。本文以药用植物桃儿七为例，利用改进原位组织块培养法不但能够分离得到内生真菌，还能清晰观察到内生真菌的着生部位，菌丝、孢子和菌落等生长状况，为药用植物地下茎内生真菌的分离、纯化、鉴定和功能开发提供可行、可靠的技术支撑。

关键词：中药植物，地下茎，内生真菌，组织块培养法

材料与试剂

1.无菌塑封取样袋（170 mm×120 mm、140 mm×100 mm）

2.花盆（220 mm×250 mm）

3.氯化汞消毒溶液

4.?纯净水（超纯水）

5.定性滤纸

6.75%乙醇溶液

7.葡萄糖（上海麦克林生化科技有限公司，麦克林，产品目录号：d810588）

8.琼脂（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，vetec, 产品目录号：v900500）

9.马铃薯（市场购买）

10.its通用引物订购（生工生物工程（上海）股份有限公司，合成部）

11.一次性培养皿

12.?真菌基因组dna试剂盒（北京艾德莱科技生物有限公司，艾德莱，产品目录号：dn4102）

仪器设备

1.超净工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司，苏州安泰，型号：sw-cj-1fd）

2.剪刀

3.手术刀

4.镊子

5.酒精灯

6.电炉

7.2l玻璃烧杯

8.霉菌培养箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂，型号：mjx-250b-z）

9.立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗机器厂，型号：lczf-50kb-ⅱ）

10.台式高速离心机（湖南赫西仪器装备有限公司，型号：tgl200mw）

11.电子精密天平（福州（美国）华志，型号：pty223/323）

12.pcr扩增仪（bio-rad公司，bio-rad，型号：t100）

13.光学显微镜（leica公司，leica，型号：dm4-b）

软件和数据库

1.ncbi数据库blast（basic local alignment search tool）(https://blast.ncbi.n66 lm.nih.gov/blast.cgi)

2.bioedit v7.2（https://bioedit.software.informer.com/7.2/）

3.genedoc v2.7.0（https://genedoc.software.informer.com/download/）

实验步骤

1.根系及根际土样品采集

以药用植物桃儿七地下茎内生真菌的分离、鉴定为例。实验样品为多年生桃儿七(sinopodophyllum hexandrum)采自甘肃省兰州市榆中县兴隆山国家自然保护区，海拔2400 m。采样时间每年8月份左右，选择结果实的桃儿七植株，完整的将地下茎挖出，将根围泥土和根系一起放入取样袋中，带回实验室。以兴隆山桃儿七根围泥土为培养基质，将桃儿七地下茎栽种于实验室温室花盆内备用。

2.药用植物地下茎表面消毒

直接从温室栽培基质中挖取桃儿七地下茎，将地下茎用自来水冲洗干净，选取直径小于5 mm的地下茎按照下列程序表面消毒：75%酒精浸泡3-5 min，拿到无菌操作台用无菌水冲洗4次，用0.1%的升汞浸泡1-3 min，再用超纯水洗涤4次后，用灭菌滤纸吸干表面水分后，留做接种备用。

3.药用植物地下茎内生真菌分离

将上述处理好的桃儿七地下茎两端烧一下，用灭菌手术刀在放有灭菌滤纸的培养皿中切掉两端，再将中间茎段切成3 mm小片，分别种植到pda培养基上，于25 ℃培养5 d，地下茎切口处长出内生真菌菌落 (图1b-f)。

为了验证表面消毒效果，将上述处理好的桃儿七地下茎切成小段，两端在酒精灯上烧一下后，种植在pda培养基上为对照试验，于25 ℃培养5 d，地下茎切口处未长出内生真菌菌落 (图1a)，表明表面消毒效果好。

图1? 桃儿七地下茎内生真菌在pda培养基上的生长情况 a：对照组；b-f：实验组

4.药用植物地下茎内生真菌纯化

将pda培养基上药用植物地下茎段长出的菌丝分别挑去到pda培养基上纯化，直到pda培养基上长出单一菌落（见图2），一般纯化2-3次即可得到单一菌落。

图2? 桃儿七地下茎内生真菌纯化单菌落菌株 a：aspergillus ochraceus；b：fusarium sp.；c：beauvetia brongniaritii；d：未鉴定；e: eucasphaeria capensis；f：未鉴定

5.药用植物地下茎内生真菌鉴定

5.1分子生物学鉴定? 在无菌操作台上挑取纯化好的内生真菌菌丝，放置于1.5 ml无菌离心管中。用真菌基因组dna试剂盒，按照说明书操作提取总dna。以提取的总dna为模板，用真菌检测鉴定通用引物its1和its4 (引物its1序列：5’-tccgtaggtgaacctgcgg-3’；引物its4序列：5’-tcctccgcttattgatatgc-3’)进行pcr扩增。琼脂糖凝胶电泳检测到目的条带，送生工生物工程（上海）股份有限公司测序。得到测序结果利用bioedit v7.2和genedoc v2.7.0软件经人工拼接后，在ncbi数据库中blast比对，对分离纯化的内生真菌菌株进行初步鉴定。

5.2 形态学鉴定? 基于分子生物学鉴定结果，有目的的进行形态学鉴定，从桃儿七地下茎分离得到的4株内生真菌的分类地位、形态特征和基物见表1。

表1? 4株桃儿七内生真菌的分类地位、形态特征和基物

分类群taxa分类地位taxonomic status形态特征morphological traits基物substrates赭曲霉(aspergillus ochraceus)fungi; dikarya; ascomycota; pezizomycotina; eurotiomycetes; eurotiomycetidae; eurotiales; aspergillaceae; aspergillus.菌落在查氏琼脂培养基上25 ℃培养7 d直径25-35 mm，10-14 d 直径35-55 mm；质地丝绒状，分生孢子结构稠密，为暗黄褐色至赭色，老后不成黑色；菌丝体白色；产生菌核，但菌核较少，奶油黄色至紫褐色；分生孢子大多球形。土壤，药材（枸杞子、玄参、杯牛滕、白芍），蘑菇、虫草，蚂蚁，羊粪，野果，霉腐物等eucasphaeria capensisfungi; dikarya; ascomycota; pezizomycotina; sordariomycetes; hypocreomycetidae; hypocreales; hypocreales incertae sedis; eucasphaeria; eucasphaeria capensis菌落在pda琼脂培养基上25 ℃培养7 d直径10-15 mm；子囊壳由子囊和假侧丝组成；子囊壳单生或簇生在子座上。子座和子囊壳柔软，有鲜明的淡黄色。树皮、树叶、木材、植物根、高等真菌的老子实体和和土壤等布氏白僵菌(beauvetia brongniaritii)fungi; dikarya; ascomycota; euascomycetidae; xylariales; clavicipitaceae; cordyceps; cordyceps brongniartii菌落在pda培养基上培养5 d可长满平板，表面高低不同，菌丝初期为白色绒毛状或棉絮状，后期形成粉状，并呈现红色。分生孢子大多呈椭圆形，生于产孢细胞顶端开叉的“乙”形丝器上。土壤、昆虫和植物根等镰孢属(fusarium sp.)fungi; dikarya; ascomycota; pezizomycotina; sordariomycetes; hypocreomycetidae; hypocreales; nectriaceae;? fusarium菌落在pda培养基上25 ℃培养7 d直径40-50 mm, 10 d可长满平板，菌丝初期为灰白色绒毛状，分生孢子座呈桂色；厚垣孢子圆形或卵圆形，壁光滑；分生孢子镰刀形；多芽型产孢细胞。土壤和植物体等

结果与分析

在pda培养基上培养5 d后观察，对照实验没有微生物生长，表明本实验消毒方法可靠。以地下茎表皮接触培养基的方式培养时(图1a、b和c)，每个培养皿中接种6个根段，其中约3-6个地下茎段均有微生物菌落出现：多数是以丝状真菌和胶质状菌落共存，此情况的丝状真菌较难纯化。只有少数地下茎段出现单一菌落(图1b和c），但只要横切面一端长出丝状真菌菌落，另一端也有相同菌落生长(图1c)。以地下茎段横切面接触培养基的方式培养时(图1d、e和f)，每个培养皿中接种10个根段，约6-8个根段均能见到丝状真菌生长，此培养方式胶质状菌落出现较少，多数以单菌落的形式在上横切面生长(图1f和g），在下横切面也有菌落生长(图1e）。由图1d、e和f实验结果可知，丝状真菌菌落多数从皮层组织长出，此结果与桃儿七地下茎真菌分布显微观察结果一致 (黄超杰等，2008)。另外，实验结果还表明：从同一条地下茎分离到内生菌相似度较高；同一株不同地下茎内生菌的差异较大。

贾粟等 (2007) 采用桃儿七地下茎表面消毒后，用无菌刀片除去外部组织，再将内部组织切成0.5cm×0.5cm小片种植于pda培养基上等方法来分内生菌。黄杰超等 (2008) 对桃儿七地下茎连续切片观察，发现较粗的地下茎菌丝分布几率较少，而且内生真菌仅存在于皮层细胞的一至二层处。本研究也曾尝试用此方法分离桃儿七地下茎内生真菌，但发现除去根外部组织的步骤不仅操作复杂、容易交叉污染的同时，还容易破坏皮层细胞，不易观察到内生真菌的着生位点和较纯的菌落。利用本研究提供的内生真菌分离方法，能可靠的分离纯化到根部内生真菌。该方法简单、易于操作。张昆等 (2008)、杨显志 (2003) 和李海燕 (1999; debbab et al., 2009)等利用该方法成功的分离到多株桃儿七内生真菌，但他们没有提供内生菌分离的试验图片。药用植物内生真菌中有很多是不产孢的，首先通过诱导产孢法判断是否产孢，如果诱导产孢不成功，可利用多基因联合系统发育树进行进一步鉴定。本研究提供了内生菌的分离图片，能清晰看到内生真菌的着生部位，菌丝、孢子和菌落的生长情况，验证了该方法对植物根或地下茎内生真菌分离的可行性和可靠性。

大量的显微观察研究发现植物根部内生真菌菌丝的侵染部位主要集中在皮层细胞的某些区域，并不侵染内皮层和维管束 (谭小明等，2006；赵小锋等，2007)。图1d、e和f的研究结果从可培养微生物的角度进一步验证了内生真菌只集中在皮层细胞的某些区域。因此，在对植物根部内生真菌分离时，选择根的合适部位和可靠的分离方法是十分必要的。

对分离纯化的内生真菌先进行分子生物学鉴定，在分子生物学鉴定的基础上，再有目的地开展形态学观察和鉴定，核对真菌鉴定手册或真菌志上菌株的培养及形态特征，对分子生物学鉴定结果进行核对和验证，并可以在分子生物学鉴定结果的基础上进一步细分。例如在本研究中分子生物学方法对白僵菌菌株只鉴定到属，结合形态学分类将该菌株鉴定到种，为布氏白僵菌 (祝英等，2015)。目前真菌分类体系更新非常快，通常需要结合该属的最新分类学进展进行科学鉴定，一般通过mycobank就知道目前该属的描述物种的数量，通过相应的文献链接，可以清楚了解最新的物种检索表，以提高鉴定结果的可靠性。总之，先利用分子生物学鉴定再形态鉴定，不但能减少从海量资料中查找、搜索未知菌株形态特征的时间，而且还能对分子生物学鉴定结果进行核实、验证。该技术为药用植物地下茎内生真菌的分离、纯化和鉴定提供支撑，为药用植物地下茎内生真菌的功能开发和利用奠定基础。

溶液配方

1.马铃薯葡萄糖琼脂(pda)培养基 (周德庆等，2006)

马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂15 g，自来水1000 ml，ph自然。

制备方法：马铃薯去皮后切成小块，加水煮沸20-30 min，用4层纱布过滤，滤液中加葡萄糖和琼脂，加热融化后再补充水分至1000 ml，121 ℃下灭菌20 min。

致谢

感谢国家科技部国际合作项目（2013dfa30950）；甘肃省民生计划项目（1209fcma003）；甘肃省科学院创新团队项目(cx2019）；甘肃省科学院应用研发项目（2018jk-15）和甘肃省科学院优秀青年基金项目（2016yq-02＆2019qn-02）对本研究的大力支持。

参考文献

1.黄超杰, 孟益聪, 冯虎元.(2008) 濒危药用植物桃儿七根的显微结构及其菌根真菌分布研究[j]. 菌物学报, 27(6): 922-929.

2.贾粟, 陈疏影, 翟永功, 等.(2007) 近年国内外植物内生菌产生物活性物质的研究进展[j]. 中草药, 38(11): 1750-1753.

3.张琨, 黄建新, 曹莉, 等. (2008) 桃儿七内生菌及产鬼臼类物质菌株的筛选[j]. 西北大学学报(自然科学版), 38(3): 431-434.

4.杨显志, 郭仕平. (2003) 鬼臼类植物产鬼臼毒素内生真菌的筛选[j]. 天然产物研究与开发, 15(5): 419-422.

5.李海燕, 王志军, 张玲琪, 等. (1999) 一种桃儿七内生真菌的分离初报[j]. 云南大学学报, 21(3): 47-48.

6.debbab a, aly ah, edrada-ebel r, et al. (2009) bioactive metabolites from the endophytic fungus stemphylium globuliferum isolated from mentha pulegium[j]. journal of natural products, 72(4): 626-631.

7.谭小明, 郭顺星, 周雅琴, 等. (2006) 七叶一枝花根的显微结构及其内生真菌分布研究[j]. 菌物学报, 25(2): 227-233.

8.赵小锋, 杨晖，陈欣欣, 等. (2007) 桃儿七地下茎的显微结构及内生真菌分布[j]. 甘肃科学学报, 19(3): 86-87.

9.祝英, 王治业, 杨晖, 等. 桃儿七地下茎内生真菌的分离和鉴定[j]. 中国现代中药, 2015, 17(6): 572-576.

10.周德庆. 微生物学实验教程[m]. 高等教育出版社, 2006: 372.